專利基本信息

說明書

一種從魚油中完全分離EPA和DHA的方法

技術(shù)領(lǐng)域

[0001]本發(fā)明屬于不飽和脂肪酸加工技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種從魚油中完全分離EPA和 DHA的方法。

背景技術(shù)

[0002] DHA (二十二碳六烯酸，Docosahexaenoic Acid)是一種《-3必需脂肪酸。研宄表明 DHA是人的大腦發(fā)育，成長的重要組成部分;在改善老年癡呆、抗衰老、抗腫瘤等方面有著重 要的生理調(diào)節(jié)功能。

[0003] EPA (二十碳五烯酸，Eicosapentaenoic Acid)是人體常用的幾種《-3脂肪酸之 一。EPA可幫助降低膽固醇和甘油三酯的含量，促進體內(nèi)飽和脂肪酸代謝。防止脂肪在血管 壁的沉積，預(yù)防腦血栓、腦溢血、高血壓等心血管疾病。

[0004]魚油中含有豐富的DHA和EPA。人們先后發(fā)明采用了低溫分級法、溶劑提取法、尿素 包合法、分子蒸餾法和超臨界氣體萃取法等方法，從生物體中提取0脫和即八。

[0005]研宄發(fā)現(xiàn)，EPA會在嬰幼兒早期發(fā)育過程中破壞人體內(nèi)DHa和EPA的平衡。因此，有 必要將EPA和DHA完全分離開來。

[0006]高速逆流色譜(HSCCC)技術(shù)是一種新的基于液液分配原理的分離純化技術(shù)，它不 需要任何固態(tài)支撐或載體，固定相和流動相皆為液體，無不可逆吸附。

發(fā)明內(nèi)容

[00^7]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種從魚油中完全分離EPA和DHA的方法，采用 了高速逆流色譜技術(shù)，分兩步溶劑體系從魚油中完全分離EPA和DHA，其中溶劑體系一可完 全分離EPA和DHA的混合物和其它雜質(zhì);溶劑體系二可完全分離EPA和DHA;得到高純度的EPA 和 DHA。

[0008]本發(fā)明的一種從魚油中完全分離EPA和DHA的方法，包括：

[0009] (1)將溶劑體系一充分振搖，靜置分相，分開收集上、下兩相;將魚油提取物溶解于 上相中，以上相為固定相，下相為流動相，采用高速逆流色譜進行分離，得到只含有EPA和 DHA的混合物與流動相的混合液，去除流動相，得到EPA和DHA的混合物;其中溶劑體系一由 正己烷或正庚烷，乙腈，甲醇按體積比為3?6:2?4:1?2混合而得；

[0010] (2)將溶劑體系二充分振搖，靜置分相，分開收集上、下兩相;將步驟（1)得到的混 合物溶解于上相中，以上相為固定相，下相為流動相，采用高速逆流色譜進行分離，分別得 至IJEPA與流動相的混合液和DHA與流動相的混合液，去除流動相，分別得到EPA和DHA產(chǎn)品；其 中溶劑體系一由正己纟元或正庚院，甲醇，去罔子水按體積比為15?30:10?20:2?4混合而 得。

[0011]所述步驟(1)和(2)中分開收集得到的上、下兩相進行超聲脫氣處理。 _2]所述步驟⑴中高速逆流色譜的條件為:轉(zhuǎn)向為正轉(zhuǎn)，轉(zhuǎn)速為_準(zhǔn);柱溫為25t：; 流動相的流速為5mL/min;檢測器的檢測波長為214nm。

[0013]所述步驟⑴中的去除流動相的工藝條件為:在45?c、_0.08MPa條件下進行旋轉(zhuǎn)蒸 發(fā)真空干燥。 _4]所述步驟⑵中高速逆流色譜的條件為:轉(zhuǎn)向為正轉(zhuǎn)，轉(zhuǎn)速S_rpm;柱溫為25t>c; 流動相的流速為lOmL/min;檢測器的檢測波長為214nm。

[0015]所述步驟(2)中的去除流動相的工藝條件為:在5(TC、-0.08MPa條件下進行旋轉(zhuǎn)茲 發(fā)真空干燥。

[0016] 有益效果

[0017] (1)本發(fā)明首次利用高速逆流色譜技術(shù)從魚油中同時分離純化得到高純度的即八 和 DHA。

[0018] (2)本發(fā)明的高速逆流色譜技術(shù)具有無樣品損耗、無污染、高效、大制備量，溶劑可 回收再利用等優(yōu)點。

[0019] (3)本發(fā)明中采用的兩個溶劑體系的試劑皆可回收再利用，理論上EPA和DHA可實 現(xiàn)100%回收。

具體實施方式

[0020] 下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人 員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定 的范圍。

[0021]本發(fā)明實施例中采用的試劑與儀器如下：

[0022]試劑:正己烷、正庚烷、乙腈、甲醇均為國藥集團化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)的分析純 試劑，水為去離子水，魚油提取物為市售產(chǎn)品；

[0023]儀器:高速逆流色譜儀為上海同田生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)的TBE-300C型號高 速逆流色譜儀。

[0024]實施例i

[0025] (1)將正己烷，乙腈，甲醇按體積比為6:4:1混合制得溶劑體系一，加入分液漏斗 中，充分振搖，靜置分相，獲得兩相混合液，分開收集上相和下相溶劑，分別置于超聲波振蕩 器中進行超聲脫氣處理，將魚油提取物溶解于上相溶劑中，然后以上相為固定相，下相為流 動相，采用高速逆流色譜進行分離，其中色譜條件設(shè)置為:正轉(zhuǎn)，轉(zhuǎn)速S800rpm;柱溫25; 流動相流速5mL/min;檢測器的檢測波長為214nm，得到只含有EPA和DHA的混合物與流動相 的混合液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中，在水浴溫度45 X：、真空壓強-0 ? 08MPa條件下進行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)真 空干燥，去除流動相，得到EPA和DHA的混合物。

[0026] ⑵將正己烷，甲醇，去離子水按體積比為20:20:3混合制得溶劑體系二，加入分液 漏斗中，充分振搖，靜置分相，獲得兩相混合液，分開收集上相和下相溶劑，分別置于超聲波 振蕩器中進行超聲脫氣處理，將步驟（1)得到的EPA和DHA的混合物溶解于上相溶劑中，然后 以上相為固定相，下相為流動相，采用高速逆流色譜進行分離，其中色譜條件設(shè)置為:正轉(zhuǎn)， 轉(zhuǎn)速為SOOrpm;柱溫25。(：；流動相流速lOmL/min;檢測器的檢測波長為214nm，分別得到EPA 與流動相的混合液和DHA與流動相的混合液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中，在水浴溫度5(rC、真空壓 強-0.08MPa條件下進行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)真空干燥，去除流動相，去除流動相，分別得到EPA和腿產(chǎn) 品。

[0027] 通過HPLC對本實施例獲得的EPA和DHA產(chǎn)品的純度進行分析，結(jié)果顯示:EPA純度為 99.62 % ; DHA純度為99.60 %。

[0028] 實施例2

[0029] (1)將正庚烷，乙腈，甲醇按體積比為6:4:1混合制得溶劑體系一，加入分液漏斗 中，充分振搖，靜置分相，獲得兩相混合液，分開收集上相和下相溶劑，分別置于超聲波振蕩 器中進行超聲脫氣處理，將魚油提取物溶解于上相溶劑中，然后以上相為固定相，下相為流 動相，采用高速逆流色譜進行分離，其中色譜條件設(shè)置為：正轉(zhuǎn)，轉(zhuǎn)速為800rpm;柱溫25。(：； 流動相流速5mL/min;檢測器的檢測波長為214nm，得到只含有EPA和DHA的混合物與流動相 的混合液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中，在水浴溫度45°C、真空壓強-0. OSMPa條件下進行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)真 空干燥，去除流動相，去除流動相，得到EPA和DHA的混合物。

[0030] (2)將正庚烷，甲醇，去離子水按體積比為20:20:3混合制得溶劑體系二，加入分液 漏斗中，充分振搖，靜置分相，獲得兩相混合液，分開收集上相和下相溶劑，分別置于超聲波 振蕩器中進行超聲脫氣處理，將步驟⑴得到的EPA和DHA的混合物溶解于上相溶劑中，然后 以上相為固定相，下相為流動相，采用高速逆流色譜進行分離，其中色譜條件設(shè)置為:正轉(zhuǎn)， 轉(zhuǎn)速為8〇Orpm;柱溫25°C;流動相流速lOmL/min;檢測器的檢測波長為214nm，分別得到EPA 與流動相的混合液和DHA與流動相的混合液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中，在水浴溫度50 °C、真空壓 強-0.08MPa條件下進行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)真空干燥，去除流動相，分別得到EpA和藤產(chǎn)品。

[0031]通過HPLC對本實施例獲得的Epa和DHA產(chǎn)品的純度進行分析，結(jié)果顯示:EPA純度為 96.57%;〇骱純度為97.18%。