專利基本信息

說明書

一種高純度銀杏內(nèi)酯的制備方法

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及采用高速逆流色譜法（HSCCC)從銀杏葉中制備銀杏內(nèi)酯的方法，特別是--種高純度銀杏內(nèi)酯的制備方法。

技術(shù)背景

銀杏為銀杏科落葉喬木。其葉、果實、種子均有較高的藥用價值。銀杏在我國分布很廣， 資源十分豐富。國內(nèi)外對其研究報道較多,其藥理作用不斷被認識，臨床應(yīng)用范圍逐步擴大。

銀杏葉的有效成份主要有黃酮甙和二萜內(nèi)酯兩類，銀杏葉黃酮甙主要有槲皮素甙、山奈酚武 及雙黃酮類化合物，銀杏葉中的雙黃酮成份為銀杏雙黃酮、異銀杏雙黃酮及7-去甲基銀杏雙 黃酮。到目前為止，從銀杏葉中共提得6個萜類化合物：銀杏苦內(nèi)酯A、 B、 C、 M、 J和銀 杏新內(nèi)酯，它們都具有二萜或半萜結(jié)構(gòu)，銀杏內(nèi)酯分子具有獨特的十二碳骨架結(jié)構(gòu)，嵌有--個叔丁基和6個5元環(huán)，包括一個螺(44)壬垸，一個四氫呋喃環(huán)和3個內(nèi)酯環(huán)，常見代號 BN52020、 BN52021、 BN52022、 BN52023、 BN52024,分別代表銀杏內(nèi)酯A、 B、 C、 M、 J， 其中BN52021在銀杏中的含量為0.2%,它的抗PAF(由血小板和多種炎癥細胞產(chǎn)生和分泌的 一種內(nèi)源性磷脂)選擇性和活動性最強。銀杏葉的藥理作用有血小板聚集和止血作用，能擴 張冠脈血管增加冠脈流量，保護大腦，有抗炎、抗過敏和抗休克作用。銀杏內(nèi)酯A、 B、 C 或單獨用銀杏內(nèi)酯B可以應(yīng)用于轉(zhuǎn)移癌的治療。它能提髙抗癌化療劑的效果,減少不良反應(yīng)。 銀杏內(nèi)酯還應(yīng)用于肺移植的供體和受體中，使遠距離肺移植成為可能。 銀杏內(nèi)酯的結(jié)構(gòu)式如下：

O CHU

、

H R

.>i-o

.R

3銀杏內(nèi)酯A R,= 0H， R2= R:,= H

銀杏內(nèi)酯B R產(chǎn)R產(chǎn)0H， R:產(chǎn)H 銀杏內(nèi)酯C R,= R2 = R3= OH 銀杏內(nèi)酯J R1=R3=0H， R2=H

白果內(nèi)酯的結(jié)構(gòu)式如下：

銀杏內(nèi)酯A的分子式：CMH2409，物化特性：熔點30(TC分解，易溶于氯仿、乙酸乙酯、 丙酮、乙醇、甲醇，不溶于石油醚、正己垸等。

銀杏內(nèi)酯B的分子式：C20H24O1()，物化特性：熔點30(TC分解，易溶于氯仿、乙酸乙酯、 丙酮、乙醇、甲醇，不溶于石油醚、正己烷等。

銀杏內(nèi)酯C的分子式：C2oH240n，物化特性：熔點30(TC分解，易溶于氯仿、乙酸乙酯、 丙酮、乙醇、甲醇，不溶于石油醚、正己烷等。

銀杏內(nèi)酯J的分子式：C2?3H240h)，物化特性：熔點300'C分解，易溶于氯仿、乙酸乙酯、 丙酮、乙醇、甲醇，不溶于石油醚、正己垸等。

白果內(nèi)酯的分子式：Cl5H1808，物化特性：熔點300'C分解，易溶于氯仿、乙酸乙酯、

丙酮、乙醇、甲醇，不溶于石油醚、正己烷等。

銀杏葉中的五個銀杏內(nèi)酯共同存在，審于這五個化合物結(jié)構(gòu)相似、極性相近，因而分離工作 較為困難，各個內(nèi)酯之間的分離只能用傳統(tǒng)的色譜法進行有效分離。有機溶劑提取法是國內(nèi)

外使用最為廣泛的方法，由于銀杏葉中含黃酮類化合物和內(nèi)酯較少（分別為1.7%及0.6% 左右），因此最終所得浸膏中此兩類成分含量往往不高，所含雜質(zhì)較多，需將此浸膏用液-液萃取法、沉淀法和吸附洗脫法進行進一歩的分離純化，但回收率低，成本高；樹脂吸附純

化法近年來有較大的發(fā)展，將銀杏葉以65Q/o乙醇回流提取，減壓濃縮，ZTC澄清劑沉降。 其黃酮苷和內(nèi)酯含量分別達到26%和6%以上。對吸附銀杏葉中銀杏總內(nèi)酯用50%乙醇沸 提銀杏葉干粗粉，濾液上724吸附樹脂柱，最后得淡黃色粉末狀提取物，含黃酮苷和銀杏總內(nèi)酯分別為27.4%， 10.6%。該法操作簡單，能耗低，但歩驟復(fù)雜，回收率低；近年來

國際上超臨界流體提取技術(shù)的迅速發(fā)展，用該技術(shù)提取植物中的活性成分也越來越廣泛。與 有機溶劑法相比，具有提取效率高，無溶劑殘留，活性成分和熱不穩(wěn)定成分不易被分解破壞 等優(yōu)點，通過控制溫度和壓力以及調(diào)節(jié)改性劑的種類和用量，還可以實現(xiàn)選擇性萃取和分離

純化，歐洲已有專利報道采用SFE技術(shù)除去銀杏葉粗提物中的雜質(zhì)。近年來國內(nèi)學(xué)者（姚 渭溪.銀杏葉中活性成分的提取工藝測定及其進展.中草藥，1995， 26 (3): 157)也探索 和研究用該技術(shù)提取銀杏葉黃酮類化合物，得黃綠色精提物，收率為4.1%，其中黃酮苷 含量在35%成本高。以乙醇和用大孔樹脂提取的銀杏葉精提物，于C02-SFE精制前，毒 性成分白果酸含量為2.0%，而用C02-SFE精提后，白果酸含量降低到0.02Q/o(夏開元. 二氧化碳超臨界流體萃取研究進展.中成藥，1997， 19 (5): 43); 高速逆流色譜技術(shù) (High-SpeedCountercurrent Chromatography, HSCCC)是近30年發(fā)展起來的一種連續(xù)的無 需任何固體支持物的高效、快速的液液分配色譜分離技術(shù)，其原理是利用螺旋柱在行星運動 時產(chǎn)生的離心力，使互不相溶的兩相不斷混合，同時保留其中的一相（固體相），利用恒流 泵連續(xù)輸入另一相（流動相），隨流動相進入螺旋柱的溶質(zhì)在兩相之間反復(fù)分配，按分配系 數(shù)的次序，被依次洗脫。在流動相中分配比例大的先被洗脫，反之，在固體相中分配比例大 的后被洗脫。它避免了固態(tài)支持體或載體帶來的各種問題——樣品容易被吸附、損耗和變性， 使其他液相色譜技術(shù)進行制備量分離時，其分配效率會明顯降低，溶劑消耗量大，HSCCC 保證較高峰型分辨率，分離量大、樣品無損耗、回收率高、分離環(huán)境緩和，節(jié)約溶劑。高速 逆流色譜儀能直接進大量粗提物樣品或合成混合物，分離結(jié)果能夠達到相當高的純度，甚至 能直接接質(zhì)譜儀等儀器。因此，HSCCC具有操作簡便，理論回收率為100%，重現(xiàn)性好和分 離效率高、分離量較大的特點，己廣泛應(yīng)用于生物、醫(yī)藥、環(huán)保等領(lǐng)域化學(xué)物質(zhì)的制備分離 和純化，使其成為制備銀杏黃酮苷元以及各銀杏內(nèi)酯和白果內(nèi)酯對照品的較佳手段。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是采用高速逆流色譜法（HSCCC),提供一種高純度銀杏內(nèi)酯 的制備方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案包括如下歩驟：

1. 制備銀杏總內(nèi)酯作為進樣物：

將銀杏提取物以乙醇加熱溶解，按l: 1—10的比例拌入硅膠，以乙酸乙酯、丙酮、正 己垸-乙醇混合液、石油醚-丙酮混合液等有機溶劑進行洗脫，洗脫液蒸干濃縮。

2. 制備銀杏內(nèi)酯A:

采用高速逆流色譜制備方法，銀杏總內(nèi)酯作為進樣物，體系1為四個組分（A， B， C， D)， 溶劑A組分可選自石油醚、正庚烷、正己烷等正構(gòu)垸烴，B組分可選自乙醚、乙酸乙酯、氯 仿、二氯甲烷，C組分可選自甲醇、乙醇、異丙醇、丙酮、丁酮等脂肪醇及脂肪酮，D組分為水。

調(diào)節(jié)體系1中A， B， C, D四組組分的體積比依次為：1—5:5—9:3—7:1—5例如 2:6:3:5; 3:5:3:5; 10:50:30:50等，經(jīng)一次分離后可得到銀杏內(nèi)酯A、混合組分a、混 合組分b。其中混合組分a包括銀杏內(nèi)酯C和銀杏內(nèi)酯J;混合組分b包括銀杏內(nèi)酯B和白 果內(nèi)酯。

優(yōu)選正己烷一乙酸乙酯一乙醇一水，體積比5:5:5:4。 3.分別制備銀杏內(nèi)酯C、 J和銀杏內(nèi)酯B、白果內(nèi)酯：

體系2為上述四個組分（A， B， C， D)，調(diào)節(jié)體系2中A， B， C， D四組組分的體積 比依次為：0.5—3:8—15:2—5:8—15例如2: 8:3:9 ; 3:11:3:12; 10:80:30:90等，取混 合組分a經(jīng)體系2分離后可得到銀杏內(nèi)酯C、銀杏內(nèi)酯J;

優(yōu)選體系2為正己烷一乙酸乙酯一乙醇一水，體積比1:8:2:8。

體系3為上述三個組分（B， C， D)，調(diào)節(jié)體系3中B， C， D三組組分的體積比依次為： 1—5:3—7:1—5例如2:3:5; 3:3:5; 10:30:50等，取混合組分b經(jīng)體系3分離后得到銀 杏內(nèi)酯B和白果內(nèi)酯；

優(yōu)選體系3為氯仿一甲醇一水，體積比5:4:3。

實驗條件適合溫度15—30'C，在上述溫度范圍內(nèi)，溫度較低時，出峰時間略有提前， 分離效率變化不大，對峰形無多大影響。

主機轉(zhuǎn)速和流速需控制在一定范圍內(nèi)，按體積比將溶劑體系置于分液漏斗中，搖勻靜置 分層。待平衡一定時間后，將上相（固定相）和下相（流動相）分開，采用TBE—300高速 逆流色譜儀，該機型柱體積為300ml，進樣圈為20ml，配有NS-1007泵，8823A-UV紫外檢 測器，ELSD (蒸發(fā)光散射檢測儀）和Yokogawa3057便攜式記錄儀。進樣前，先用固定相 存滿整個柱子，調(diào)整主機轉(zhuǎn)速為700~1200rpm，以1.0—2.5ml/min的流速將流動相泵入柱 內(nèi)。

本發(fā)明制備步驟包括有三個體系，二次分離過程。經(jīng)過體系1的一次分離后收集到的銀 杏內(nèi)酯A的餾分蒸干后乙醇結(jié)晶，可得到銀杏內(nèi)酯A的白色片狀結(jié)晶。接收到的混合組分 a經(jīng)過體系2分離后，得到銀杏內(nèi)酯C、銀杏內(nèi)酯J;餾分蒸干后乙醇結(jié)晶可分別得到白色 針狀結(jié)晶和無色棱柱狀結(jié)晶；接收到的混合組分b經(jīng)過體系3分離后，得到銀杏內(nèi)酯B和白 果內(nèi)酯，餾分蒸干后乙醇結(jié)晶可分別得到白色棱柱狀和白色粉末狀結(jié)晶，經(jīng)過紫外和蒸發(fā)光 散射儀檢測，純度均在99%以上。

本發(fā)明方法采用了高速逆流色譜分離技術(shù)，是一種連續(xù)的無需任何固體支持物的高效、

快速的液液分配色譜分離技術(shù)，它克服了固態(tài)支持物或載體不可逆吸附、損耗和變性，使被 分離物回收率高，理論達100%，本發(fā)明實際達到99%以上。又因為采用優(yōu)選的溶劑體系， 控制實驗條件溫度、調(diào)整主機轉(zhuǎn)速和流速的工藝條件，可以高效率的分離，獲得高純度的銀 杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C、銀杏內(nèi)酯J和白果內(nèi)酯單體（達到99%以上）。并且適合從各種工藝途徑制備的銀杏提取物。保證較高峰形分辨度，分離量大、回收率高、分離 環(huán)境緩和、節(jié)約溶劑、操作簡便。

附圖說明

圖1 銀杏內(nèi)酯分離流程。

具體實施方式

實施例1

1. 銀杏內(nèi)酯A的分離

將銀杏內(nèi)酯粗提物以乙醇加熱溶解，按1:8的比例拌入硅膠，以乙酸乙酯、丙酮、正己 烷-乙醇混合液、石油醚-丙酮混合液等有機溶劑進行洗脫，洗脫液蒸干濃縮后作為進樣物。

從體系1中選取正己烷一乙酸乙酯一乙醇一水在半制備型高速逆流色譜儀上來分離制 備銀杏內(nèi)酯A。按5:5:5:4體積比將上述溶劑組分配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待 平衡一段時間后，將上相（固定相）和下相（流動相）分開，實驗條件溫度25°C。采用TBE-300 型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，8823A-UV紫外檢測器，ELSD (蒸發(fā)光散射檢測儀） 和Yokogawa3057便攜式記錄儀。

稱取1000mg進樣物溶于20ml流動相中待用。進樣前，用固定相存滿整個柱子，調(diào)整 主機轉(zhuǎn)速為800rpm，以1.0ml/min的流速將流動相泵入柱內(nèi)直至建立動態(tài)平衡，由進樣閥進 樣：然后根據(jù)ELSD (蒸發(fā)光散射檢測儀）檢測圖譜，接收目標成分。目標餾分蒸干后用乙 醇結(jié)晶可得到銀杏內(nèi)酯A的白色片狀結(jié)晶，經(jīng)過HPLC—UV及ELSD的檢測，它們的純度 在99%以上，同時得到包括銀杏內(nèi)酯C和銀杏內(nèi)酯J的混合組分a和包括銀杏內(nèi)酯B和白 果內(nèi)酯混合組分b。

2. 銀杏內(nèi)酯C和銀杏內(nèi)酯J的分離

從體系2中選取正己烷一乙酸乙酯一乙醇一水在半制備型高速逆流色譜儀上來分離制 備銀杏內(nèi)酯C和銀杏內(nèi)酯J。按l :8:2:8體積比將上述溶劑組分配置于分液漏斗中，搖勾后 靜置分層。待平衡一段時間后，將上相（固定相）和下相（流動相）分開，實驗條件溫度控 制在25。C。采用TBE-300型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，8823A-UV紫外檢測器， ELSD (蒸發(fā)光散射檢測儀）和Yokogawa3057便攜式記錄儀。

稱取混合組份a 700mg溶于10ml流動相中待用。進樣前，用固定相存滿整個柱子，調(diào) 整主機轉(zhuǎn)速為800rpm，以1.0ml/min的流速將流動相泵入柱內(nèi)直至fe立動態(tài)平衡，由進樣閥 進樣；然后根據(jù)ELSD (蒸發(fā)光散射檢測儀）檢測圖譜，接收目標成分。目標餾分蒸干后用 乙醇結(jié)晶可得到銀杏內(nèi)酯c的白色針狀結(jié)晶和銀杏內(nèi)酯J的無色棱柱狀晶體，經(jīng)過HPLC— UV及ELSD的檢測，它們的純度在99%以上。

3. 銀杏內(nèi)酯B和白果內(nèi)酯的分離從體系3中選取氯仿一甲醇一水在半制備型高速逆流色譜儀上來分離制備銀杏內(nèi)酯B 和白果內(nèi)酯。按5:4:3體積比將上述溶劑組分配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡 一段時間后，將上相（固定相）和下相（流動相）分開，實驗條件溫度控制在25'C。采用 TBE-300型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，8823A-UV紫外檢測器，ELSD(蒸發(fā)光散 射檢測儀）和Yokogawa3057便攜式記錄儀。

稱取混合組分b 400mg溶于10ml流動相中待用。用固定相存滿整個柱子，調(diào)整主機轉(zhuǎn) 速為800rpm，以1.0ml/min的流速將流動相泵入柱內(nèi)直至建立動態(tài)平衡，由進樣閥進樣；然 后根據(jù)ELSD (蒸發(fā)光散射檢測儀）檢測圖譜，接收目標成分。目標餾分蒸干后用乙醇結(jié)晶 可得到銀杏內(nèi)酯B的白色棱柱狀和白果內(nèi)酯的白色粉末狀晶體，經(jīng)過HPLC—UV及ELSD 的檢測，它們的純度在99%以上。

1. 銀杏內(nèi)酯A的分離

將銀杏內(nèi)酯粗提物以乙醇加熱溶解，按1:2或1:9的比例拌入硅膠，以乙酸乙酯、丙酮、 正己垸-乙醇混合液、石油醚-丙酮混合液等有機溶劑進行洗脫，洗脫液蒸干濃縮后作為進樣 物。

從體系1中選取正己烷一乙酸乙酯一乙醇一水在半制備型高速逆流色譜儀上來分離制 備銀杏內(nèi)酯A。按2:6:4:2體積比將上述溶劑組分配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待 平衡一段時間后，將上相（固定相）和下相（流動相）分開，實驗條件溫度25'C。采用TBE-300 型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，8823A-UV紫外檢測器，ELSD (蒸發(fā)光散射檢測儀） 和Yokogawa3057便攜式記錄儀。

稱取1000mg進樣物溶于20ml流動相中待用。進樣前，用固定相存滿整個柱子，調(diào)整 主機轉(zhuǎn)速為800rpm，以1.0ml/min的流速將流動相泵入柱內(nèi)直至建立動態(tài)平衡，由進樣閥進 樣；然后根據(jù)ELSD (蒸發(fā)光散射檢測儀）檢測圖譜，接收目標成分。目標餾分蒸干后用乙 醇結(jié)晶可得到銀杏內(nèi)酯A的白色片狀結(jié)晶，經(jīng)過HPLC—UV及ELSD的檢領(lǐng)ij，它們的純度 在99%以上，同時得到包括銀杏內(nèi)酯C和銀杏內(nèi)酯J的混合組分a和包括銀杏內(nèi)酯B和白 果內(nèi)酯混合組分b。

2. 銀杏內(nèi)酯C和銀杏內(nèi)酯J的分離

從體系2中選取正庚垸一乙酸乙酯一甲醇一水在半制備型高速逆流色譜儀上來分離制 備銀杏內(nèi)酯C和銀杏內(nèi)酯J。按O. 5:9:3:8體積比將上述溶劑組分配置于分液漏斗中，搖勻 后靜置分層。待平衡一段時間后，將上相（固定相）和下相（流動相）分開，實驗條件溫度 控制在25。C。采用TBE-300型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，8823A-UV紫外檢測器， ELSD (蒸發(fā)光散射檢測儀）和Yokogawa3057便攜式記錄儀。

稱取混合組分a 700mg溶于10ml流動相中待用。進樣前，用固定相存滿整個柱子，調(diào)

實施例2

8整主機轉(zhuǎn)速為800rpm,以l.Oml/min的流速將流動相泵入柱內(nèi)直至建立動態(tài)平衡，由進樣閥 進樣；然后根據(jù)ELSD (蒸發(fā)光散射檢測儀）檢測圖譜，接收目標成分。目標餾分蒸干后用 乙醇結(jié)晶可得到銀杏內(nèi)酯c的白色針狀結(jié)晶和銀杏內(nèi)酯J的無色棱柱狀晶體，經(jīng)過HPLC— UV及ELSD的檢測，它們的純度在99%以上。 2.銀杏內(nèi)酯B和白果內(nèi)酯的分離

從體系3中選取氯仿一甲醇一水在半制備型高速逆流色譜儀上來分離制備銀杏內(nèi)酯B 和白果內(nèi)酯。按2:4:3體積比將上述溶劑組分配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡 一段時間后，將上相（固定相）和下相（流動相）分開，實驗條件溫度控制在25°C。采用 TBE-300型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，8823A-UV紫外檢測器，ELSD(蒸發(fā)光散 射檢測儀）和Yokogawa3057便攜式記錄儀。

稱取混合組分b 400mg溶于10ml流動相中待用。用固定相存滿整個柱子，調(diào)整主機轉(zhuǎn) 速為800rpm，以1.0ml/min的流速將流動相泵入柱內(nèi)直至建立動態(tài)平衡，由進樣閥進樣；然 后根據(jù)ELSD (蒸發(fā)光散射檢測儀）檢測圖譜，接收目標成分。目標餾分蒸干后用乙醇結(jié)晶 可得到銀杏內(nèi)酯B的白色棱拄狀結(jié)晶和白果內(nèi)酯的白色粉末狀晶體，經(jīng)過HPLC—UV及 ELSD的檢測，它們的純度在99%以上。

實施例3

1. 銀杏內(nèi)酯A的分離

將銀杏內(nèi)酯粗提物以乙醇加熱溶解，按1:5的比例拌入硅膠，以乙酸乙酯、丙酮、正己 烷-乙醇混合液、石油醚-丙酮混合液等有機溶劑進行洗脫，洗脫液蒸干濃縮后作為進樣物。

從體系1中選取正己烷一乙酸乙酯一乙醇一水在半制備型高速逆流色譜儀上來分離制 備銀杏內(nèi)酯A。按4:8:6:4體積比將上述溶劑組分配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待 平衡一段時間后，將上相（固定相）和下相（流動相）分開，實驗條件溫度25°C 。釆用TBE-300 型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，8823A-UV紫外檢測器，ELSD (蒸發(fā)光散射檢測儀） 和Yokogawa3057便攜式記錄儀。

稱取1000mg進樣物溶于20ml流動相中待用。進樣前，用固定相存滿整個柱子，調(diào)整 主機轉(zhuǎn)速為800rpm，以1.0ml/min的流速將流動相泵入柱內(nèi)直至建立動態(tài)平衡，由進樣閥進 樣；然后根據(jù)ELSD (蒸發(fā)光散射檢測儀）檢測圖譜，接收目標成分。目標餾分蒸干后用乙 醇結(jié)晶可得到銀杏內(nèi)酯A的白色片狀結(jié)晶，經(jīng)過HPLC—UV及ELSD的檢測，它們的純度 在99%以上，同時得到包括銀杏內(nèi)酯C和銀杏內(nèi)酯J的混合組分a和包括銀杏內(nèi)酯B和白 果內(nèi)酯混合組分b。

2. 銀杏內(nèi)酯C和銀杏內(nèi)酯J的分離

從體系2中選取正己烷一乙酸乙酯一乙醇一水在半制備型高速逆流色譜儀上來分離制 備銀杏內(nèi)酯C和銀杏內(nèi)酯J。按2:14:4:12體積比將上述溶劑組分配置于分液漏斗中，搖勻

后靜置分層。待平衡一段時間后，將上相（固定相）和下相（流動相）分開，實驗條件溫度控制在25t:。采用TBE-300型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，8823A-UV紫外檢測器， ELSD (蒸發(fā)光散射檢測儀）和Yokogawa3057便攜式記錄儀。

稱取混合組分a 700mg溶于10ml流動相中待用。進樣前，用固定相存滿整個柱子，調(diào) 整主機轉(zhuǎn)速為800rpm，以1.0ml/min的流速將流動相泵入柱內(nèi)直至建立動態(tài)平衡，由進樣閥 進樣；然后根據(jù)ELSD (蒸發(fā)光散射檢測儀）檢測圖譜，接收目標成分。目標餾分蒸干后用 乙醇結(jié)晶可得到銀杏內(nèi)酯C的白色針狀結(jié)晶和銀杏內(nèi)酯J的無色棱柱狀晶體，經(jīng)過HPLC— UV及ELSD的檢測，它們的純度在99%以上。

2.銀杏內(nèi)酯B和白果內(nèi)酯的分離

從體系3中選取氯仿一甲醇一水在半制備型高速逆流色譜儀上來分離制備銀杏內(nèi)酯B 和白果內(nèi)酯。按4:6:4體積比將上述溶劑組分配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡 -段時間后，將上相（固定相）和下相（流動相）分丌，實驗條件溫度控制在25°C。采用 TBE-300型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，8823A-UV紫外檢測器，ELSD(蒸發(fā)光散 射檢測儀）和Yokogawa3057便攜式記錄儀。

稱取混合組分b400mg溶于10ml流動相中待用。用固定相存滿整個柱子，調(diào)整主機轉(zhuǎn) 速為800rpm，以1.0ml/min的流速將流動相泵入柱內(nèi)直至建立動態(tài)平衡，由進樣閥進樣；然 后根據(jù)ELSD (蒸發(fā)光散射檢測儀）檢測圖譜，接收目標成分。目標餾分蒸干后用乙醇結(jié)品 可得到銀杏內(nèi)酯B的白色棱拄狀結(jié)晶和白果內(nèi)酯的白色粉末狀晶體，經(jīng)過HPLC—UV及 ELSD的檢測，它們的純度在99%以上。